真核转录组测序(RNA-seq)是指利用新一代高通量测序技术,全面、快速地研究真核生物细胞或组织在特定状态下几乎所有转录本(包括mRNA、rRNA、tRNA及non-coding RNA等)的序列信息和动态表达信息,从而准确地分析基因表达差异、基因结构变异、RNA编辑、单核苷酸变异,鉴定可变剪切与融合基因以及发掘新基因等。
转录组是连接基因组和蛋白质组的纽带,是揭示生物各项生命活动规律、发现致病基因关键靶点等研究的最佳手段,目前已广泛应用于生命科学基础研究、临床诊断与药物开发等领域。
构建链特异性文库,经过测序后的数据分析可以确定转录本来自于正义链还是反义链。与普通文库相比,能够更准确的统计转录本的数量,确定基因结构,同时还可以挖掘新的ncRNA与反义转录本,为基因表达分析提供了有力的支持。
技术路线
技术参数
服务名称 |
测序策略 |
推荐数据量 |
测序周期 |
真核转录组测序 |
HiSeq PE150 |
6-12G |
40个工作日 |
样品要求
1. 总RNA量≥3µg,浓度≥100ng/μL。
2. OD260/OD280在1.8-2.0之间,RNA无降解、28S和18S核糖体RNA条带非常亮且清晰(其大小决定于用于抽提RNA的物种类型),28S的密度大约是18S的2倍;Aglient 2100检测仪分析RNA完整性数据RIN ≥ 6.5;无蛋白质、基因组DNA污染,如有污染请去蛋白并进行DNase I处理。